新闻凝血

巧用凝固曲线识别Fibrinogen Longmont

2024/11/15

遗传性异常纤维蛋白原血症往往由于FIB（纤维蛋白原）Clauss法与PT衍生法结果比值明显偏低（<0.7）^[1]而被发现，但并非所有异常纤维蛋白原血症都有类似表现，例如Fibrinogen Longmont。Fibrinogen Longmont变异中β链的第166号氨基酸由Arg（精氨酸）变为了> Cys（半胱氨酸），进而导致纤维蛋白丝的横向交联障碍，产生了可凝固并且透明的纤维蛋白凝块^[2]。因其凝固过程中的吸光度变化过低，Clauss 法与PT衍生法检测结果都可能表现为低值，从而容易被误认为低纤维蛋白原血症，但我们发现，通过凝固曲线可以初步鉴别Fibrinogen Longmont（其实是一种异常纤维蛋白原血症）和低纤维蛋白原血症。在此和大家分享一下Fibrinogen Longmont独特的凝固曲线特征。

案例经过

患者，女，59岁，因“发现低钾血症半年，发现右侧肾上腺占位5个月”入院，术前筛查发现PT、APTT、DD、FDP正常，TT轻度延长18.8s（Ref:11-17s），FIB Clauss法与PT衍生法均无法测出，且仪器报警提示凝固过程中吸光度变化低于仪器要求的最低吸光度变化阈值，因此仪器提示检测失败。患者的肝功能完全正常，自述既往无出血病史。外科医生考虑可能是遗传性低纤维蛋白原血症并推迟了手术，但通过病历发现患者12年前曾做过甲状腺切除术，术中及术后并未发生严重出血事件。综合考虑以上因素，我们决定从凝固曲线着手对该患者结果进一步分析。

凝固曲线分析

FIB-C的检测原理是将凝固过程中吸光度变化37%阈值时（即起始点的吸光度+37%*Δ吸光度）的凝固时间带入标准曲线来计算样本中的纤维蛋白原浓度。因此决定FIB Clauss方法检测结果的是凝固时间而非ΔmAbs（吸光度变化量）。我们将该患者血浆、正常混合血浆（NPP）、典型低纤维蛋白原血浆FIB-C凝固曲线放在一起进行比较。

可以看到患者FIB凝固曲线与典型的低纤曲线存在明显差异，虽然两者吸光度变化（纵坐标）均明显低于正常对照血浆，但患者的 FIB 凝固时间（横坐标）明显缩短，甚至短于正常对照血浆，而典型低纤曲线的凝固时间是明显延长的。因此从凝固时间来看，患者的FIB浓度理论上应高于正常对照血浆的FIB浓度（3.06g/L），但为何凝固过程中的ΔmAbs低于仪器要求的最低阈值呢？我们怀疑患者血浆凝固过程中生成的凝块可能非常透明，从而导致吸光度变化较小，不满足仪器的最低阈值要求，因此决定使用手工法来验证。

手工法验证

我们用手工法进行FIB的检测，取500μL 用因子稀释液进行1:10稀释后的血浆，加入250μL FIB试剂，再观察凝固过程，发现患者的纤维蛋白凝块相比于正常对照的确更加透明疏松（图4）。

基因检测

之后进行了FIB基因检测，发现存在Bβ166Arg->Cys突变（如图5），证实该患者为遗传性异常纤维蛋白原血症患者，即Fibrinogen Longmont。

正常血浆混合试验

最后，对于该案例我们产生一个疑问：仪器检测失败的原因是ΔmAbs<15，如果我们想办法将凝固过程的ΔmAbs提高到15以上，仪器是否就可以检测出结果呢？因此我们进行了Fibrinogen Longmont血浆与NPP（FIB Clauss法检测浓度3.06g/L）1:1混合实验。然而意外的发现，混合后血浆的FIB检测仍因ΔmAbs较低而未出结果（图6），从这点来看，Fibrinogen Longmont与正常纤维蛋白原之间可能也存在横向交联障碍，从而表现出明显的抑制效应。

总结

Fibrinogen Longmont最初发现于美国Longmont诊所并因此命名，随后的研究提示纤维蛋白原β链第166号氨基酸由精氨酸到半胱氨酸的转变可能影响了纤维蛋白的聚合（特别是原纤维的聚合），进而导致相对透明的纤维蛋白凝块生成^[2]。如果仪器内置的运算法则比较严格，这种透明特性因其吸光度变化小，可能会导致光学法仪器的检测结果失败，而磁珠法仪器可能给出相对正常的结果，但也存在漏诊的风险。因此多数Fibrinogen Longmont都是因为磁珠法正常而光学法异常的检测结果而被发现^[3]。

根据既往报道来看，Fibrinogen Longmont的临床表现（出血、血栓和无症状）是不确定的。因此Fibrinogen Longmont患者的出血风险需要结合病史或血栓弹力图检测等进行综合评估。及时发现Fibrinogen Longmont是有意义的，对于无出血史的患者来说，明确纤维蛋白原结果减低的原因可以在一定程度上避免频繁的血制品输注，而对于有难以解释的出血表现的患者来说，明确原因是才能进行针对性止血治疗。

那么使用光学法仪器的实验室遇到类似Fibrinogen Longmont的病例如何发送FIB检测报告呢？我们建议对于仪器能够给出具体结果的样本，按照仪器结果报告；对于仪器检测失败的样本，基因检测一般耗时较长，实验室可以利用凝固曲线进行初步分析（注意与低纤维蛋白原血症的区分），然后结合手工法检测和正常血浆混合实验综合判断，符合Fibrinogen Longmont特征时及时与临床沟通（提示患者可能是Fibrinogen Longmont突变，出血风险建议结合病史或血栓弹力图检测综合评估），并在检测报告中进行备注。

本文作者

徐向东

华中科技大学同济医学院附属同济医院光谷院区

毕业于华中科技大学同济医学院

检验科血栓与止血工作台主管

曾获得中华医学会检验与临床融合精品案例大赛三等奖

参与发表国内外论文数篇

参考文献

[1]周伟杰,闫婕,邓东红,林发全. 遗传性异常纤维蛋白原血症的诊断[J].中华检验医学杂志, 2020, 43(4):408.

[2]Lounes KC, Lefkowitz JB, Henschen-Edman AH, Coates AI, Hantgan RR, Lord ST. The impaired polymerization of fibrinogen Longmont (Bbeta166Arg-->Cys) is not improved by removal of disulfide-linked dimers from a mixture of dimers and cysteine-linked monomers. Blood. 2001 Aug 1;98(3):661-6.

[3]Lefkowitz JB, DeBoom T, Weller A, Clarke S, Lavrinets D. Fibrinogen Longmont: a dysfibrinogenemia that causes prolonged clot-based test results only when using an optical detection method. Am J Hematol. 2000 Mar;63(3):149-55.

[4]徐向东,唐宁,王雄,廖庆,冯家立 & 张闽霞.(2024).利用凝固曲线分析与手工法检测快速识别1例Fibrinogen Longmont.血栓与止血学(03),131-134.

Share Press Release: